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本生帶您了解 pcr 耗材,八聯(lián)管、pcr 96 孔板選擇!

更新時間:2021-03-17    點擊次數(shù):2334

本生帶您了解 pcr 耗材,八聯(lián)管、pcr 96 孔板選擇!
 

首先今天我們來聊聊 PCR 實驗中很關(guān)鍵的要素——耗材。作為 PCR ???,了解 PCR 耗材相關(guān)的特性和術(shù)語是有必要的。
 

市面上的 PCR 耗材有很多,各種品牌、規(guī)格、顏色等,讓人眼花繚亂。我們來慢慢認(rèn)識它。材質(zhì) PCR 耗材的原材料通常是聚丙烯。它是一種很好的耐熱惰性物質(zhì)(使用溫度范圍為 -30~140℃),能夠承受 PCR 反應(yīng)熱循環(huán)過程中的熱能變化,很好地封閉和保護(hù) PCR 反應(yīng)體系中的物質(zhì)。
 

顏色常見的有白管和透明管。在傳統(tǒng) PCR 實驗中,兩者沒有區(qū)別。但是,在相同的熒光定量/qPCR 實驗中,對于頂端信號讀取的 qPCR 儀器(在管的上方采集熒光信號)來說,白管的靈敏度和一致性相對更高。這是為什么呢?
 

>>與透明管相比,A  白管得到的 Ct 值更低;B  白管得到的重復(fù)性更好
 

qPCR 的核心數(shù)據(jù)是 Ct 值,而熒光信號是 Ct 值計算的數(shù)據(jù)來源,所以管內(nèi)的熒光能否完好地傳遞至檢測器是至關(guān)重要的。白色的管壁能夠阻止熒光穿過管壁和折射(下圖 A),進(jìn)而防止熒光傳至加熱模塊(放管子的金屬孔壁),被模塊吸收或發(fā)生不一致反射等情況。相比于透明管,在白管的頂端能夠采集到更強,更聚焦的熒光信號。
 

A 透明管和白管中熒光信號走向;B 分別加入等量熒光素后,熒光強度對比

So,假如你正在使用的是頂讀 qPCR 儀,那么安利一下,不妨用白管試試哦~
 

質(zhì)量(是否干凈)這里強調(diào)一下耗材質(zhì)量的重要性。qPCR 耗材必須保證沒有污染物和抑制劑。高壓和輻射能夠去除細(xì)菌和 DNA 酶,但不能去除灰塵和 DNA 殘留,它們可能會抑制 PCR 反應(yīng)或產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增。物質(zhì)是具有吸光度的,即便是很小的污染物也會吸收反應(yīng)體系中的熒光,影響熒光信號的采集。用一個夸張版的實驗來演示一下雜質(zhì)污染對實驗的影響,在八聯(lián)排的一個反應(yīng)孔中放入一粒雜質(zhì),不出所料,擴(kuò)增結(jié)果曲線出現(xiàn)了顯著的異常。
 

↑ 8 復(fù)孔重復(fù)性反應(yīng)結(jié)果,左邊孔中的雜質(zhì)讓曲線“跑偏”
 

Tips 注意不要讓耗材長期暴露在空氣中,取出耗材后,一定要快速封好包裝袋,避免用裸手接觸。有條件的話,可在超凈臺中操作。容量/尺寸/通量
 

容量決定了可加樣的多少(反應(yīng)體積)。加樣過多會導(dǎo)致熱傳導(dǎo)效率下降,溢出或交叉污染;而加樣不足會引起樣品蒸發(fā)損耗。qPCR 儀的加熱模塊也會決定可適配的耗材和適用的反應(yīng)體系大小。通量很容易理解,就是單次實驗多能上多少個樣品。常見的容量和通量規(guī)格如下表所示
 

單管/八聯(lián)排 0.2mL、0.1mL

96 孔板 0.2mL、0.1mL

384 孔板 0.02mL


容量規(guī)格也常用標(biāo)準(zhǔn)和低容量來區(qū)分。low profile(低容)耗材的高度更低,這種短小設(shè)計地減少了反應(yīng)體系上方的空間(“死體積”——無用部分),降低熱循環(huán)過程中的蒸發(fā)影響,同時能夠讓加熱模塊更大程度地將其包裹,提高熱傳導(dǎo)效率。因此,低容管也被稱為“快速”管或板。
 

Tips 常見的反應(yīng)體積一般為 20 µL,推薦使用 0.1 mL 或 low profile 的低容反應(yīng)管。管壁厚度
 

PCR 耗材的管壁厚度要均一,才能提供一致的熱傳導(dǎo)。超薄管壁較標(biāo)準(zhǔn)版薄 50%,可進(jìn)一步減少熱屏障,帶來更快更好的反應(yīng)效果。當(dāng)然,建議選超薄的。
 

透明度 qPCR 的管蓋和封膜需要具有很高的光學(xué)透性,確保的熒光信號的穿透和傳遞,減少失真(針對頂讀 qPCR 儀)。管壁的透明度越高反倒會影響實驗結(jié)果,理由在前面解釋過。傳統(tǒng) PCR 可忽略此特點。裙邊 PCR 板的裙邊指的是板的周圍延伸部分。額.......這個裙邊作用是在構(gòu)建反應(yīng)體系時為移液過程提供穩(wěn)定性支撐,以及結(jié)合自動化工作站時提供機械強度和抓手。常見的有三種:無裙邊、半裙邊和全裙邊(對應(yīng)下圖 A、B、C)。
 

Tips 簡單理解就是,裙邊的意義更多在于為工業(yè)化、自動化批量處理提供便利,與機械臂的結(jié)合。在常規(guī)科研實驗室中可能不太需要,使用無裙邊板即可。
 

封板膜


PCR 封板膜由透明塑料或鋁箔制成。黏性透明薄膜比較常見,適配于 96 或 384 孔板,要有足夠好的光透性。可以在封膜時用個小卡片把孔周圍的膜壓緊,避免漏氣等現(xiàn)象。實驗室里的貼膜 boy 們應(yīng)該很熟悉了吧??梢院唵卫斫鉃?.....
 

黏性鋁膜可能比較少見,盡管不適合 qPCR,但對于光敏樣品是的耗材,由于可以穿刺,便于 PCR 中樣品轉(zhuǎn)移。(適用于傳統(tǒng) PCR)
 

總結(jié):耗材作為 PCR 體系的載體,對提高實驗數(shù)據(jù)質(zhì)量是非常重要的。 有關(guān) pcr 耗材,八聯(lián)管、pcr 96 孔板選擇!?本生生物小編就分享到這了,看完本文您就應(yīng)該有了基本的認(rèn)識和了解相信大家都明白了吧!總的來說,希望對大家有所幫助。
 

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